MALS детекторы
Метод многоуглового лазерного светорассеяния или метод МУЛС — это наиболее точный, быстрый и чувствительный метод определения молекулярной массы. Метод состоит в точном измерении интенсивности рассеянного света и определении концентрации и позволяет проводить измерения молекулярной массы независимо от конформации молекул в момент анализа, не оказывая какого-либо влияния на исследуемое вещество.
Для анализа высокомолекулярных соединений часто используют сочетание детекторов МУЛС с системами разделения, такими как:
- Гель-фильтрация;
- гель-проникающая хроматография (ГПХ);
- система полевого фракционирования в потоке (ПФП).
Анализ с помощью детекторов МУЛС выходящих из хроматографической колонки фракций (измерение в потоке) устраняет зависимость исследований от:
- Некорректной калибровки хроматографа;
- неверно определённого времени удерживания и соотношения размера и массы макромолекул.
Анализаторы молекулярной массы могут быть также использованы отдельно от систем разделения (измерения без разделения на фракции), в этом случае анализаторы определяют среднюю молекулярню массу всех присутствующих в растворе соединений, для большей надежности измерения проводятся при различной концентрации исследуемого вещества. Параллельные измерения в потоке и без предварительного разеделния на фракции позволяют оценить потери вещества и диссоциацию агрегатов в хроматографической колонке.
Принцип метода статистического рассеяния света (СРС) заключается в измерении усреднённой по времени интенсивности излучения, рассеянного раствором невзаимодействующих частиц. Интенсивность света является суммой интенсивностей от каждой частицы в отдельности. Суммарная интенсивность рассеянного света зависит от длины световой волны, интенсивности падающего света, рассеивающего объема, концентрации рассеивающих частиц, поляризуемости частицы и угла рассеяния. Поляризуемость частицы определяется её размером. Измерение интенсивности света на нескольких углах позволяет построить уравнение угловой зависимости интенсивности рассеянного света и определить размер частицы (радиус инерции в методе СРС). Полученные значения радиуса инерции используются для вычисления молекулярной массы по методу Зимма.
Это более точный метод определения молекулярной массы по сравнению с анализом динамического рассеяния света (ДРС). Метод ДРС позволяет определить коэффициент диффузии высокомолекулярных соединений в растворе и на основе полученных данных — размер макромолекул. Для вычисления молекулярной массы анализаторы ДРС используют теоретические модели, связывающие массу макромолекулы с её размером. Анализаторы, использующие метод МУЛС, проводят прямые измерения молекулярной массы.